噬菌體展示技術(shù)在新藥研發(fā)方面有著廣泛的使用，在之前我們和大家聊過(guò)有關(guān)噬菌體的相關(guān)只是，大家可以點(diǎn)擊“什么是噬菌體展示技術(shù)?它的主要作用有哪些?”去詳細(xì)了解一下。后來(lái)有很多客戶問(wèn)到有關(guān)噬菌體展示文庫(kù)構(gòu)建方面的知識(shí)，有鑒于此，我們?cè)谶@里統(tǒng)一和大家聊一聊。

　　什么是噬菌體展示文庫(kù)構(gòu)建?

　　我們知道，噬菌體展示技術(shù)就是通過(guò)將外源基因插入到噬菌體蛋白外殼基因的適當(dāng)位置，讓其隨著噬菌體的傳代，在子代噬菌體表面得到展示，而后通過(guò)篩選和淘選的過(guò)程后，獲得我們所需蛋白的方式。而噬菌體展示文庫(kù)則是多種不同外源基因噬菌體的集合。

　　如何構(gòu)建噬菌體展示文庫(kù)?

　　1、淘選

　　利用靶點(diǎn)抗原或者細(xì)胞組織和噬菌體文庫(kù)作用，淘選出能夠和靶點(diǎn)特異性結(jié)合或者功能的展示噬菌體，洗脫下來(lái)擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)兩到五輪淘選，富集和擴(kuò)增陽(yáng)性噬菌體文庫(kù) 。

　　2、篩選

　　對(duì)陽(yáng)性噬菌體文庫(kù)進(jìn)行單克隆挑選，通過(guò)高通量的測(cè)序和功能學(xué)實(shí)驗(yàn)(ELISA)確定單一的能夠和靶點(diǎn)抗原蛋白結(jié)合的抗體片段的蛋白序列和基因序列 。

　　噬菌體文庫(kù)構(gòu)建的一般流程

　　1、提取所需RNA或mRNA;

　　2、對(duì)多色RNA或mRNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得第一鏈cDNA;

　　3、通過(guò)多個(gè)引物，將cDNA庫(kù)中的輕重鏈復(fù)制并擴(kuò)增出來(lái);

　　4、在引物上增加酶切位點(diǎn)，再次擴(kuò)增出cDNA中的輕重鏈;

　　5、利用技術(shù)手段將輕鏈基因和重鏈基因拼接到一起;

　　6、將拼接的輕重鏈整合到噬菌體質(zhì)粒上;

　　7、擴(kuò)增建立噬菌體TG1庫(kù);

　　8、通過(guò)進(jìn)一步擴(kuò)增和純化，獲得噬菌體文庫(kù);

　　噬菌體文庫(kù)的質(zhì)量主要有文庫(kù)的大小、文庫(kù)抗體可變區(qū)的多樣性、基因片段層次分步等方面，所以，我們?cè)谂袛嘁粋€(gè)噬菌體文庫(kù)好壞時(shí)，完全可以從這幾個(gè)方面入手查看。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供噬菌體文庫(kù)構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。