納米抗體是一種從駝?lì)悇?dòng)物以及鯊魚等動(dòng)物體內(nèi)提取的一種天然缺失輕鏈的抗體，因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)很小，達(dá)到納米級，因此被稱為納米抗體。納米抗體的可溶性極高，而且不易聚集、耐高溫、耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿等，適用于各種原核、真核蛋白的表達(dá)。下面，普健生物和大家具體聊聊有關(guān)納米抗體制備的具體過程。

　　1、目的基因提取

　　從動(dòng)物體內(nèi)(駝?lì)悇?dòng)物或鯊魚)提取所需的RNA和cDNA，通過相關(guān)的生物技術(shù)手段，將其提取出來并進(jìn)行克隆表達(dá);

　　2、納米抗體基因構(gòu)建

　　通過選擇適當(dāng)?shù)囊?，對VHH基因進(jìn)行擴(kuò)增。而后將擴(kuò)增后的VHH基因克隆到表達(dá)載體(一般包含啟動(dòng)子、標(biāo)記基因以及VHH基因等)中;

　　3、選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)

　　一般來說，原核表達(dá)與真核表達(dá)的選擇是各不相同的。對于原核表達(dá)系統(tǒng)來說，可以選擇大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)，而對于真核表達(dá)系統(tǒng)過來說，可以選擇哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)來進(jìn)行表達(dá);

　　4、蛋白表達(dá)及優(yōu)化

　　通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染或細(xì)菌感染的方式，將目的基因轉(zhuǎn)染到表達(dá)載體中，通過對相關(guān)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化(比如溫度、培養(yǎng)基成分、轉(zhuǎn)染時(shí)間等)，從而提升納米抗體的表達(dá)概率;

　　5、細(xì)胞培養(yǎng)

　　通過調(diào)控相應(yīng)的培養(yǎng)條件，對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使得目的基因隨著蛋白的表達(dá)而表達(dá)，而后通過相關(guān)細(xì)胞破碎技術(shù)，將蛋白釋放出來，而后通過離心等方式獲得細(xì)胞上清液;

　　6、蛋白純化

　　通過親和層析法(通過特異性靶標(biāo)結(jié)合的特性，使用親和層析柱來提升其純度)、透析法(在進(jìn)行親和層析后，進(jìn)行透析，去除其中的雜質(zhì))、離心法(利用超速離心的方式去除細(xì)胞碎片和大顆粒物)等方式，提升蛋白的純度;

　　7、蛋白評估

　　對蛋白進(jìn)行純度、功能等各方面特性的評估，而后將其進(jìn)行凍存，以實(shí)現(xiàn)其長期保持的穩(wěn)定性;

　　以上就是納米抗體制備的一般表達(dá)過程，當(dāng)然了，對于不同的公司來說，因?yàn)榧夹g(shù)、儀器、技術(shù)團(tuán)隊(duì)等方面的區(qū)別，其制備過程有著一定不同，但是，總體來說是大體相同的。而納米抗體制備的具體流程，需要結(jié)合目的蛋白的不同方式來進(jìn)行選擇，這樣才能更好地獲得所需蛋白。更多納米抗體制備的相關(guān)知識(shí)，敬請關(guān)注普健生物。