蛋白是生物體內(nèi)的重要成分,它參與生物學功能中的各種角色,無論是結構支撐還是代謝調(diào)節(jié),都有著它的身影。為了研究蛋白的特性,科學家們往往需要將所需蛋白從細胞內(nèi)提取出來,其中涉及到的操作可謂多種多樣。在這個過程中,也衍生出了各種專業(yè)名詞。就比如蛋白提取和蛋白純化,從字面意思上來說都是講蛋白分離出來,但是,為什么又要用到兩個詞呢?今天,普健生物和大家具體聊聊。
蛋白提取和蛋白純化是同一個操作嗎?
不是的。蛋白提取的主要過程是將蛋白從細胞中分離出來,最后的操作可以看做是初步的純化操作,而蛋白純化則是提升混合液中蛋白濃度的一種方法。想要進一步了解,我們只需要了解到蛋白的具體提取過程就行。
蛋白提取的過程是怎樣的?
1、細胞破碎。通過機械法(超聲波、攪拌等)、化學法(細胞壁酶等)方法將細胞進行破碎,使得細胞內(nèi)的蛋白得以釋放;
2、離心。將破碎后的混合物進行離心,去除底部的細胞壁和細胞核,從而獲得包含蛋白的上清液;
3、沉淀。通過添加鹽或是有機溶劑,使得其中的雜質得以沉淀,而后在通過離心或過濾的方式來進行收集;
4、萃取。通過固相吸附劑等物質對所得蛋白進行富集和分離;
蛋白純化的過程是怎樣的?
蛋白純化是將蛋白從蛋白提取后的溶液中分離出來的一種方法,通過這個操作,能夠極大程度上提升蛋白的濃度。具體純化方法,我們一般選擇如下幾種:
1、凝膠電泳。這個方法是按照蛋白的大小、電荷等性質分離蛋白,通過凝膠電泳,將相關特性的蛋白分離出來,主要用作蛋白的分析以及預處理;
2、柱層析。主要原理是根據(jù)蛋白分子的大小、電荷、親和力等特性,將蛋白從雜質中分離出來的方法;
3、親和純化。通過目標蛋白的特異性分析,將其與具備相關特性的配體進行親和性結合,將目標蛋白吸附到某種固相材料上,而后再將其洗脫下來,以獲得目標蛋白;
4、超濾法。采用一些超濾技術,將小分子雜質從中過濾出去,從而獲得純度更高的蛋白;
其實大家不難看出,蛋白提取與蛋白純化其實就是蛋白制備中的兩個步驟,進行蛋白提取之后,根據(jù)需求再進行蛋白純化工作,以便于更好的對蛋白進行應用。蛋白制備其實是一個非常嚴謹且復雜的過程,需要注意好相關細節(jié)操作,才能更好的保證蛋白的表達。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。