之前我們和大家聊過(guò)有關(guān)重組蛋白表達(dá)因?yàn)樵O(shè)計(jì)問(wèn)題而導(dǎo)致的表達(dá)異常情況，可以說(shuō)，它是蛋白表達(dá)失敗很重要的一個(gè)原因。今天，我們?cè)俸痛蠹伊牧挠嘘P(guān)因?yàn)椴僮鞣矫媸д`而導(dǎo)致的相關(guān)問(wèn)題，希望對(duì)大家的實(shí)驗(yàn)有所幫助。

　　其實(shí)，重組蛋白表達(dá)失誤的情況并不少見(jiàn)，只要注意如下幾點(diǎn)，一般都不成問(wèn)題。

　　1、質(zhì)粒構(gòu)建問(wèn)題。當(dāng)我們?cè)谕瓿少|(zhì)粒構(gòu)建后，除了普通的酶切鑒定和PCR鑒定外，還需要進(jìn)行質(zhì)粒的測(cè)序工作，只有在確保無(wú)任何突變的情況下，我們才能對(duì)其進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。當(dāng)然了，出現(xiàn)序列缺失或多余的情況就更不能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)了;

　　2、宿主菌確定。在進(jìn)行表達(dá)之前，我們需要確定宿主菌是正確可用的，如果有問(wèn)題，則會(huì)直接造成表達(dá)失敗;

　　3、蛋白降解問(wèn)題。一般來(lái)說(shuō)，宿主菌內(nèi)存在很多蛋白酶，它會(huì)造成蛋白的降解。所以，很多情況下，并不是蛋白沒(méi)有表達(dá)，而是表達(dá)出來(lái)后又被降解了，這樣，也很難讓我們檢測(cè)到蛋白的存在。一般這個(gè)時(shí)候，我們需要加入一些藥劑來(lái)抑制蛋白酶的產(chǎn)生;

　　4、培養(yǎng)基問(wèn)題。選錯(cuò)培養(yǎng)基，或者選擇的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)液錯(cuò)誤，也可能會(huì)造成表達(dá)失敗(選擇合適的培養(yǎng)基即可);

　　5、分子異常情況。蛋白的分子量或大小等相關(guān)因素與預(yù)期偏差較大，這個(gè)可以說(shuō)是因?yàn)樵O(shè)計(jì)或者中間過(guò)程出現(xiàn)了偏差導(dǎo)致，我們需要進(jìn)行相關(guān)分析后再次進(jìn)行表達(dá);

　　總的來(lái)說(shuō)，因?yàn)椴僮麇e(cuò)誤導(dǎo)致蛋白表達(dá)異常的情況還是比較多的，這就要求我們?cè)谌粘?shí)驗(yàn)中多注重細(xì)節(jié)問(wèn)題，只有做好了這些方面的工作，才能保證重組蛋白的高效表達(dá)。當(dāng)然了，影響蛋白表達(dá)的因素還有很多，這就需要我們做好各類檢測(cè)工作，只有達(dá)到了相應(yīng)的需求后，才能進(jìn)一步保障實(shí)驗(yàn)的成功率。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。